新型冠狀病毒（2019-nCoV） 抗原檢測試劑盒
注冊證號：國械注準20223400361
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實時熒光PCR技術(shù)是新冠病毒核酸檢測的主要方法。每一個標本的檢測結(jié)果都會以一張擴增曲線圖呈現(xiàn)，需要檢驗人員的“專業(yè)慧眼”去分辨，判斷出“陰性”還是“陽性”。然而在實際操作中，核酸擴增曲線并非次次“完美”，易受到多種因素影響。因此如何判讀擴增曲線，對準確報告新冠核酸檢測結(jié)果至關(guān)重要。
正常擴增曲線長啥樣？
正常擴增曲線呈S型，分為基線期、指數(shù)起始期、指數(shù)擴增期和平臺期，且要求拐點清楚，整體平行性好，基線平而無上揚現(xiàn)象。
異常擴增曲線解析
異常擴增曲線是核酸檢測人員最為頭疼的問題。辨別擴增曲線形態(tài)、分析產(chǎn)生異常擴增曲線的原因是檢測人員的必備技能。每一條擴增曲線的判讀需要慧眼識別和經(jīng)驗處理。我們總結(jié)了檢測過程中遇到過的異常擴增曲線，與大家進行分享。
01 內(nèi)標擴增曲線異常
正常的內(nèi)標擴增曲線是實驗有效性的基礎(chǔ)，可反映樣本質(zhì)量、抽提和擴增效率。
【曲線特點】：
【類型一】某標本內(nèi)標無S型擴增曲線。
【類型二】外源性內(nèi)標呈離散型曲線。
【原因分析】：
a) 標本采樣欠佳，沒有刮取到足夠的鼻咽部細胞。
b) 標本保存不當，核酸降解。
c) 標本加錯位置或漏加。
d) 提取失?。毫呀庖何椿靹颍ㄍ庠葱詢?nèi)標）、提取儀故障等。
e) 擴增失?。郝┘臃磻?yīng)液、模板加錯孔位、混入抑制擴增反應(yīng)的干擾物等。
【解決方案】：
a) 重新采集樣本。
b) 送檢標本及時檢測，室溫放置不超過4h。
c) 按照規(guī)范化流程進行相關(guān)操作。
d) 定期對在崗人員進行操作考核。
【注】內(nèi)標擴增曲線異常，則該批或相應(yīng)標本結(jié)果無效，需重新采樣或重新檢測。
02 基線設(shè)定不當?shù)漠惓U增曲線
【曲線特點】：
軟件默認基線設(shè)定的擴增曲線呈波浪型，導(dǎo)致Ct值偏大，可能會被誤判為陰性。
【原因分析】：
軟件默認基線設(shè)定不準確造成擴增曲線異常。
【解決方案】：
根據(jù)檢測試劑的要求設(shè)定適宜的基線。
03 軟件優(yōu)化造成的異常擴增曲線
【曲線特點】：
軟件優(yōu)化后擴增曲線向斜上方抬起，導(dǎo)致Ct減小，根據(jù)優(yōu)化后擴增曲線會誤判為陽性，但原始信號未有明顯擴增。
【原因分析】：
根據(jù)設(shè)定基線，軟件在自動優(yōu)化擴增曲線時會放大微小異常信號。
【解決方案】：
查看原始曲線，對基線稍作調(diào)整。
【注】自動優(yōu)化軟件會放大微小的異常信號，可根據(jù)原始曲線判斷信號真假。
04 多個標本單靶標通道翹尾
【曲線特點】：
多個標本出現(xiàn)單靶標通道的擴增曲線翹尾。
【原因分析】：
a) 反應(yīng)液配制后保存不當，如熒光探針斷裂。
b) 存在陽性質(zhì)控污染或者其他熒光物質(zhì)污染。
c) 擴增試劑/耗材的批間差異導(dǎo)致非特異性擴增增加（如試劑更新后Mg2+濃度過高）。
【解決方案】：
a) 按照說明書要求保存配制的擴增反應(yīng)液。
b) 提取得到的核酸應(yīng)及時進行后續(xù)處理，否則及時封蓋，避免混入陽性質(zhì)控或其他干擾物；實驗室每天按時清潔消毒以消除潛在的干擾因素。
c) 試劑/耗材批號更換前應(yīng)進行比對實驗驗證。
05 靶標通道呈低平S型曲線
【曲線特點】：
標本靶標通道呈低平且非典型S型擴增曲線，標本與弱陽性質(zhì)控的熒光強度存在顯著差異。
【原因分析】：
a) 標本存在干擾物質(zhì)。
b) 提取純化不完全。
【解決方案】：
標本重新檢測，必要時可使用不同的檢測試劑進行確認。
【注】對疑似標本建議使用不同的檢測試劑進行確認。在異常擴增曲線判斷時，應(yīng)根據(jù)整批標本的擴增情況（弱陽性質(zhì)控擴增曲線）綜合判斷。
06 蒸發(fā)引起的異常擴增曲線
【曲線特點】：
反應(yīng)體系蒸發(fā)，終體積減少，熒光強度產(chǎn)生變化導(dǎo)致陰性擴增曲線整體呈斜向上或山域型。
【原因分析】：
a) 在擴增過程中因熱蓋導(dǎo)致管蓋爆裂/光學(xué)膜破裂。
b) 未蓋緊管蓋/刮緊光學(xué)膜。
c) 未使用配套/質(zhì)量合格的耗材。
【解決方案】：
a) 定期檢查擴增儀狀態(tài)，確保熱蓋溫度正常。
b) 上機前蓋緊管蓋/刮緊光學(xué)膜。
c) 使用廠商推薦的合格擴增耗材。
d) 調(diào)整基線可適當糾正蒸發(fā)引起的異常信號，有助于后續(xù)的擴增曲線判讀。
07 氣泡引起的異常擴增曲線
【曲線特點】：
擴增曲線出現(xiàn)劇烈或明顯曲折。
【原因分析】：
反應(yīng)體系內(nèi)有大氣泡形成折射，干擾熒光的采集。
【解決方案】：
a) 加樣時減少氣泡的產(chǎn)生，同時上機前可通過離心減少氣泡。
b) 調(diào)整基線可適當糾正氣泡引起的異常信號，有助于后續(xù)的擴增曲線判讀。
08 鋸齒形異常擴增曲線
【曲線特點】：
所有通道的擴增曲線出現(xiàn)鋸齒狀。
【原因分析】：
擴增儀電壓不穩(wěn)、采光或者濾光片故障。
【解決方案】：
檢查擴增儀電壓和光路系統(tǒng)，及時排除硬件故障，防止后續(xù)檢測的異常結(jié)果。若擴增儀故障嚴重影響擴增曲線判讀時應(yīng)重新檢測。
總結(jié)
新冠核酸檢測過程中每一個環(huán)節(jié)的操作都有可能產(chǎn)生異常擴增曲線，干擾結(jié)果判讀。檢測人員在上崗前需完成操作培訓(xùn)和考核，在實際工作中嚴格遵循規(guī)范化流程，掌握專業(yè)知識，積累實踐經(jīng)驗，才能保證新冠核酸的檢測質(zhì)量。
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